EN FR Caracterización estructural y bioquímica de las enzimas involucradas en la biosíntesis de ácido clorogénico. Caracterización estructural y bioquímica de las enzimas involucradas en la biosíntesis de ácidos clorogénicos

Resumen: Los ácidos clorogénicos (CGA) representan una familia de ésteres formados por un derivado de ácido cinámico combinado con ácido quínico o ácido shikímico. Estos metabolitos secundarios producidos por fenilpropanoides están muy extendidos en las plantas terrestres y son una fuente importante de antioxidantes de alimentos. Los ésteres de HydroxycinNamoy-CoA son los precursores de CGC y otros compuestos fenólicos, como ligninas. Estos intermedios activados se sintetizan a partir de un ácido hidroxicináminario y la coenzima A por 4-cummarate CoA ligasa (4Cl) que pertenecen a la superfamilia de las enzimas de adenilatos. La nicotiana TABACUM 4CL2 se utilizó para la producción de ésteres y su estructura se resolvió con reemplazo molecular. Dos genes que codifican para HydroxycinNamoy-CoA Shikime / Quinate Hydroxycinnamoyltransferases en Coffea Canephora se han clonificado. CCHCT y CCHQT, que pertenecen a la superfamilia de aciltransferasas acil-co-co-co-dependentes, se han sobreexpresado en E. coli y se purificaron a la homogeneidad. El análisis de difracción de rayos X CCHCT hizo posible determinar su estructura por reemplazo molecular. Se ha derivado un modelo por homología de secuencia para CCHQT para proporcionar determinantes de preferencia por ácido quínico o ácido shikímico. Se ha realizado modelos moleculares para identificar los residuos potencialmente involucrados en las interacciones de sustrato de enzimas. El análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento de las reacciones enzimáticas ha demostrado que estas enzimas son capaces de sintetizar el ácido de 5-O-Caffeoiláquínico, pero también el diéster de 3,5-O-didicediylinico, que es un compuesto de grano de café importante. Maduración. La producción de variantes mediante mutagénesis dirigida ha permitido la identificación de grandes residuos para la catálisis de reacciones de mono y diacilación. El enfoque combinado de la biología estructural y la enzimología es particularmente útil para comprender mejor el papel de HCT y HQT.

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