IT FR Caratterizzazione strutturale e biochimica degli enzimi coinvolti nella biosintesi acida clorogenica Caratterizzazione strutturale e biochimica di enzimi coinvolti nella biosintesi degli acidi clorogenici

Abstract: gli acidi clorogenici (CGAS) rappresentano una famiglia di esteri formati da un derivato di acido cinnamo combinato con acido quinic o acido shikimico. Questi metaboliti secondari prodotti da fenilpropanoidi sono diffusi in piante terrestri e sono una fonte importante di antiossidanti alimentari. Gli esteri HydroxycinNamey-Coa sono i precursori di CGC e altri composti fenolici come lignini. Questi intermedi attivati sono sintetizzati da un acido idrossicinnamico e da un coenzima A di 4-coumarate CoA Ligase (4CL) appartenente alla superfamiglia degli enzimi adenilati. Nicotiana Tabacum 4CL2 è stato utilizzato per la produzione di esteri e la sua struttura è stata risolta dalla sostituzione molecolare. Due geni Codifica per HydroxycinNamey-CoA Shikimate / Qininate Idroxycinnamoyltransfias a Coffea Canephora sono stati clonati. CCHCT e CCHQT, che appartengono alla superfamiglia di acytransferasi acyl-co-co-co-co-dipendenti, sono stati sovraespressi in E. coli e purificati all’omogeneità. L’analisi della diffrazione dei raggi X CCHCt ha permesso di determinare la sua struttura mediante sostituzione molecolare. Un modello è stato derivato dall’omologia della sequenza per CCHQT per fornire determinanti di preferenza per acido quinic o acido shikimico. La modellazione molecolare è stata effettuata per identificare i residui potenzialmente coinvolti nelle interazioni del substrato enzimatico. L’analisi della cromatografia liquida ad alte prestazioni delle reazioni enzimatiche ha dimostrato che questi enzimi sono in grado di sintetizzare acido 5-o-caffeylaquinic, ma anche il Diano 3,5-o-dresoylinic, che è un importante composto di grano di caffè. Maturazione. La produzione di varianti mediante la mutagenesi diretta ha permesso l’identificazione di grandi residui per la catalisi delle reazioni mono- e diazionamento. L’approccio combinato della biologia strutturale e dell’enzimologia è particolarmente utile per comprendere meglio il ruolo di HCT e HQT.

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