O vírus da diarréia viral bovino (BVDV) NS3 proteína, quando Expressed sozinho em células de mamíferos, induz a apoptose que se correlaciona com a ativação Caspase-8 e Caspase-9

Resumo: As cepas de vírus de diarréia viral bovino (BVDV) existem como dois biótipos, citopáticos (CP) e não-caixa (PCP) (CP) ), de acordo com seus efeitos nas células de cultura tecidual. Foi anteriormente relatado que a morte celular associada ao CP BVDV in vitro é mediada pela apoptose. Aqui, os experimentos foram realizados para determinar o envolvimento da proteína NS3 na indução da apoptose. O NS3- e NS3 $ \ Delta $ 50 (excluídos do NH2-terminal 50 aminoácidos) – sequências de codificação de CDNA de tensão de referência CP de BVDV NADL foram clonadas em vetores adenovirais (adv) da qual o gene de juros do BVDV poderia ser expresso de um promotor de tetraciclina-responsivo. As células A549TTA infectadas in vitro com NS3 ou NS3 $ \ Delta $ 50 – expressando adv apresentaram alterações citopáticas caracterizadas por arredondamento e desapego de células, e condensação de cromatina do núcleo. Ensaios de fragmentação de DNA, lançamento citocromo C e ativação de caspases celulares realizadas nessas células infectadas claramente correlacionadas com as mudanças citopáticas observadas com apoptose. O processo apoptótico induzido por BVDV NS3 $ \ Delta $ 50 foi inibido por inibidores peptídicos específicos de caspase-8 e -9 (Z-IETD-FMK e Z-Lehd-FMK). Além disso, a apoptose foi inibida em células que expressam a subunidade R1 do vírus de herpes simplex tipo 2 Ribonucleotide redutase (HSV2-R1) ou HSP70, duas proteínas que são conhecidas por inibir a apoptose associada à ativação do caspase-8 e citocho casspase-9 ativação, respectivamente. Dado que o HSV2-R1, um inibidor específico da via de ativação do caspase-8, a apoptose de eficientemente suprimida e também impediu a ativação do CasPase-9, os resultados globais indicam que o BVDV NS3 / NS3 $ \ Delta $ 50 induz a apoptase iniciada pela ativação do caspase-8 e subseqüente cycochrome c lançamento-dependente da casspase-9.

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